徕卡高压冷冻仪的这些知识值得我们学习

发表时间:2022-05-20      点击次数:106
  冷冻电镜技术简化,并将其应用在生物分子成像方向,打破了长期以来解析蛋白必须依靠传统X射线晶体学(X-raycrystallography),核磁共振(NMR)的手段,使我们在近期内很有可能获得原子级别分辨率下的生命复杂机制的详细图像。
 
  徕卡高压冷冻仪是通过液氮制冷,通过空气压缩机提供压力来源,通过物理原理可使局部压强达到2100拔,从而实现对含水样本的高压冷冻固定, 冷冻固定后样品经后续处理(冷冻替代/常温超薄切片,冷冻超薄切片或冷冻断裂等)供电子显微镜观测。能在毫秒级别内大程度地保存样品生活状态的原始真实信息,蛋白质结构、酶/抗原活性无变化,可溶性离子及小分子得到有效固定等等,有效避免了常规化学固定带来的假象。除了可以结合冷冻切片,完成CEMOVIS的工作外,它还可以结合冷冻断裂,冷冻替代等来观察样品的内部超微结构或进行免疫学的相关工作。除此之外,它还可以结合光刺激和电刺激,为神经生理学家打开了一扇新的大门。
 
  徕卡高压冷冻仪的制备程序可为两类:
  1.无溶液制备法:包括取材、快速冷踪、冷冻替代、切片、干燥、染色或不染色、镜检等几个步骤。主要用于可溶性物质的放射白显影和X射线微区分析。
  2.固定样品制备法:包括取材、样品包埋或不包埋、冷冻保护处IR、快速冷冻切片、染包及镜检等步骤。适用于进行形态学、细胞化学和免疫细胞化学研究。
 
  徕卡高压冷冻仪的主要技术路线是: 通过冷冻制样技术(高压冷冻,保存样品原始的亚细胞结构信息),制备得到冷冻超薄切片(或通过投入冷冻技术冷冻样品),之后借助冷冻光镜观察荧光标记位置,记录感兴趣的位置,然后在冷冻TEM中实现原位电镜观察,从而实现光镜电镜联用技术。
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